1) 含量:>1x106 個/mL
2) 生長特性:貼壁
3) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
細胞用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) T25瓶中的培養基取出離心后,去上清,添加6ml新的完全培養基,重新加入原T25培養瓶。
4) 如果細胞長滿90%請及時進行細胞傳代,傳代培養用本公司附帶的完全培養基。
大鼠肺微血管內皮細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 大鼠肺微血管內皮細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,補加培養基至6ml。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 將上清取出,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量完全培養基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:4比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為類;
1,細胞凍存時,取出上清,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。