細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長繁殖的技術(shù)。細(xì)菌在自然界中分布極廣,數(shù)量大,種類多,它可以造福人類,也可以成為致病的原因。大多數(shù)細(xì)菌可用人工方法培養(yǎng),即將其接種于培養(yǎng)基上,使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。
細(xì)菌培養(yǎng)是一個(gè)復(fù)雜的技術(shù)。培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基,制定培養(yǎng)條件(溫度、pH值、時(shí)間,對氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上,做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細(xì)菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。一般細(xì)菌可在有氧條件下,37℃中放18~24小時(shí)生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個(gè)別細(xì)菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個(gè)月之久。
由于細(xì)菌無處不在,因此從制備培養(yǎng)基時(shí)開始,整個(gè)培養(yǎng)過程必須按無菌操作要求進(jìn)行,否則外界細(xì)菌污染標(biāo)本,會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果;而培養(yǎng)的致病菌一旦污染環(huán)境,就會(huì)引起交叉感染。
以光合細(xì)菌培養(yǎng)方法為例。光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法,按次序分為容器、工具的消毒,培養(yǎng)基的制備,接種和培養(yǎng)管理四個(gè)步驟。
(一)容器、工具的消毒。
(二)培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是淡水種,菌種培養(yǎng)可用蒸餾水,生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水(或井水)配制。如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種,則用天然海水配制培養(yǎng)基,注意在海水中加入磷元素時(shí),不能用磷酸氫二鉀,應(yīng)用磷酸二氫鉀,不然會(huì)產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒
菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
3.培養(yǎng)基配制
根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量,逐一溶解,混合,配成培養(yǎng)基。也可先配成母液,使用時(shí)按比例加入一定的量即可。
(三)接種培養(yǎng)基配好后,應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高,一般為20%~50%,即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1,不應(yīng)低于20%,尤其是微氣培養(yǎng),接種量更應(yīng)高些,否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢,影響培養(yǎng)的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。
(四)培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過程中,管理工作包括日常管理操作和測試,生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個(gè)方面。
培養(yǎng)成敗標(biāo)準(zhǔn)
生長情況的觀察和檢查光合細(xì)菌生長情況的好壞是培養(yǎng)成敗的標(biāo)準(zhǔn)。在培養(yǎng)過程中,可以通過觀察菌液的顏色及其變化來了解光合細(xì)菌生長繁殖的大體情況,菌液的顏色是否正常,接種后顏色是否由淺變深,均反映光合細(xì)菌是否正常生長繁殖以及繁殖速度的快慢。必要時(shí)可通過顯微鏡檢查,了解情況。