一、原理:
體外培養細胞生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的聯系,如隨著分裂指數的不斷提高,細胞也就進入了指數生長期。分裂指數指細胞群體中分裂細胞所占的百分比,它是測定細胞周期的一個重要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。
二、儀器、用品與試劑
1、儀器與用品:CO2培養箱、普通顯微鏡、細胞培養血、蓋玻片、吸管
2、試劑:培養液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
三、操作步驟
1、消化細胞,將細胞懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。
2、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上。
3、取出蓋片,按下列順序操作:
PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。
4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。
5、計算:
分裂指數=分裂細胞數/總細胞數×100%
四、注意事項;
操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落。