人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）介紹：人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用，無(wú)表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。
1） 來(lái)源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞
2） 形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞，懸浮
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）用途：僅供科研使用。
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)步驟
一．人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇；雙抗，1%。
2） 參考傳代比例：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。
3） 參考換液頻率：傳代時(shí)換液
4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5） 凍存液：完全培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長(zhǎng)）
6） 【注意事項(xiàng)】：
a) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。同時(shí)，您在收到細(xì)胞后，請(qǐng)不要通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。
b) 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。
c) 該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別，可參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū)中的品牌、貨號(hào)），若不添加，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)造成影響。
d) 該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請(qǐng)參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū)）。
e) 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量
ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說(shuō)明
https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal
（thp-1懸浮細(xì)胞。這些細(xì)胞更喜歡條件培養(yǎng)基和溫和處理，而不是離心和全培養(yǎng)基更換。添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度。
頻繁的細(xì)胞計(jì)數(shù)是監(jiān)測(cè)thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過(guò)向燒瓶中簡(jiǎn)單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來(lái)培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)時(shí)，到第2天，細(xì)胞通常可以擴(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個(gè)活細(xì)胞/ ml時(shí)需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過(guò)1×10（6）活細(xì)胞/ ml。）
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。
3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
