好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶

消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶

裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中，懸浮細胞需離心處理，加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基，

放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體

操作見細胞培養(yǎng)步驟。

三、細胞培養(yǎng)步驟

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入

5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL

培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入

6cm 皿中，加入約 6ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL

培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿

中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸

液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄

去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM 條件下離

心 8-10 分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入細胞庫推薦的無血清凍存液。

PS：若客戶收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放

到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培

養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若

密度未超過 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直

接進行傳代（方法同上）。