一、菌種簡(jiǎn)介
1、菌種名稱(chēng):克氏假單胞菌 Pseudomonas knackmussii
2、分離基物:土壤/椰子樹(shù)腐爛芯覆土
3、具體用途:研究
二、斜面或平板:
1、拿到安瓿管中平板形式提供的菌種后請(qǐng)及時(shí)使用,成置4-15度條件下暫存,一般不超過(guò)一周,我們隨附的空白平板供您應(yīng)急.
2、若是多次使用,應(yīng)制做成甘油管,放置在使-70℃至80℃冰箱或液氮中保藏。
方法見(jiàn)下。
三、凍干管:
1、將安瓿管上部(非樣品一端)在酒精燈上先均勻燒均表面,然后再燒灼上部一側(cè);
2、滅菌水棉球點(diǎn)燒灼部位,出現(xiàn)裂紋后(注意安甌管不要倒置);用滅菌鑷子敲開(kāi):
3.加入液體培養(yǎng)基約100uL(注意管壁可能會(huì)很燙,可冷卻后再加液),打勻取少許接種至適宜培養(yǎng)基。
附: -80℃和液氮保藏方法:
(1) 培養(yǎng):將菌種接種于合適培養(yǎng)基,培養(yǎng)基用固體或液體均可,對(duì)生長(zhǎng)較快(如大部分弧菌、希瓦氏菌)和生長(zhǎng)較慢的菌株用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)比較好。培養(yǎng)時(shí)期掌握在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或?qū)?shù)生長(zhǎng)后期。
(2)收集菌體:液體培養(yǎng)時(shí),離心棄去上清液;以平板或斜面培養(yǎng)時(shí),刮取菌體。
(3)保護(hù)劑:20%甘油(或20%甘油+5%海藻糖保藏效果更好)滅菌。
(4)分裝:將菌體與保護(hù)劑混勻,菌體用量不能太少,混勻后看上去要渾濁;分裝到若干凍存管。
(5)降溫:及時(shí)放冰箱,先放-20℃,1-2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至-70℃至-80℃。如放入液氨中保藏,須注意樣品溫度降至-40℃以下再放。
(6)活化: 從冰箱或液氮中取出甘油管后,立即放置在40C溫水中搖晃使冰融化,約需50秒-100秒;吸取適量?jī)?nèi)容物至適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)。
*也可從冰箱或液氮中取出后,用低溫冰盒保溫,牙簽刮取少許冰接種至合適培養(yǎng)基,甘油管可再放回原處低溫保藏(注意動(dòng)作要快避免過(guò)度升溫)。
四、常用培養(yǎng)基
1、培養(yǎng)基名稱(chēng): 2216E
2216E培養(yǎng)基
酵母提取物 |
1.0 |
g |
蛋白胨 |
5.0 |
g |
牛肉膏 |
1.0 |
g |
正磷酸鐵四水物FePO4 x 4H2O |
0.01 |
g |
瓊脂 |
16.0 |
g |
過(guò)濾海水 |
1.0 |
L |
PH |
7.4-7.6 |