產(chǎn)品名稱 |
bEnd.3 [BEND3] |
商品貨號(hào) |
MZ-0750 |
中文名稱 |
小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 |
規(guī)格 |
T25 |
組織來(lái)源 |
腦微血管;內(nèi)皮細(xì)胞;BALB/c |
形態(tài)特征 |
上皮樣 |
生長(zhǎng)特性 |
貼壁生長(zhǎng) |
特征特性 |
細(xì)胞用表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行轉(zhuǎn)化。 觀察到血管性血友病因子的表達(dá)及對(duì)熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白(LDL)的攝入確認(rèn)其內(nèi)皮細(xì)胞特性。 bEnd.3 cells細(xì)胞可用細(xì)胞因子和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的Peyer's結(jié)高內(nèi)皮細(xì)胞受體, 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素的表達(dá)。 腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導(dǎo)作用是濃度及時(shí)間依賴的。 代數(shù)較早的bEnd.3細(xì)胞未受刺激時(shí)在表面表達(dá)MAdCAM-1,但過了30代后就不表達(dá)了。 細(xì)胞粘附分子 1 (ICAM-1)持續(xù)表達(dá),并在LPS, IL-1 and TNF a處理后升高。 30代前血管細(xì)胞粘附分子 1 (VCAM-1)持續(xù)表達(dá),但30代后不表達(dá)。 bEnd.3細(xì)胞中腫瘤壞死因子a (TNF alpha)可以誘導(dǎo)P-選擇素的表達(dá),30代后更強(qiáng)。 |
培養(yǎng)條件 |
DMEM+10%FBS+丙酮酸 |
傳代方法 |
1:2傳代 |
凍存條件 |
無(wú)血清細(xì)胞凍存液 |
細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |