| 產(chǎn)品名稱 |
人脂肪干細(xì)胞永生化 |
| 商品貨號(hào) |
MZ-4047 |
| 中文名稱 |
人脂肪干細(xì)胞永生化 |
| 組織來源 |
人的正常脂肪組織。 |
| 形態(tài)特征 |
長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 |
| 生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
| 特征特性 |
根據(jù)不同來源及分化階段，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞具有分化為多種不同組織的能力，但在倫理上存在爭議。成體干細(xì)胞因其來源廣泛、增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)，現(xiàn)已成為組織工程學(xué)研究的首選種子細(xì)胞。其中，脂肪干細(xì)胞作為組織工程修復(fù)的種子細(xì)胞，因其具有來源豐富、取材容易、增殖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，正受到越來越多的關(guān)注。 脂肪干細(xì)胞形態(tài)類似成纖維細(xì)胞，具有較強(qiáng)的增殖能力。在一定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，具有多向分化潛能。 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Tert基因。CD44免疫熒光染色為陽性，CD45免疫熒光染色為陰性 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
