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人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞(正常組織)
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mingzhoubio@163.com
浙江省寧波市鎮(zhèn)海區(qū)莊市街道興莊路9號
創(chuàng)e慧谷42號樓B幢401室
人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞(正常組織)
人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞(正常組織)
規(guī)格:
貨期:
編號:MZ-4139
品牌:Mingzhoubio
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產(chǎn)品名稱
人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞(正常組織)
商品貨號
MZ-4139
組織來源
正常關(guān)節(jié)組織;人
規(guī)格
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
細(xì)胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。
細(xì)胞描述
滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層,淡紅色,平滑閃光,薄而柔潤,由疏松結(jié)締組織組成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu),除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。 滑膜分泌滑液,在關(guān)節(jié)活動中起重要作用。正?;し譃閮蓪樱幢〉募?xì)胞層(內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層),是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜,貼附于非關(guān)節(jié)面部分,覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上,不在軟骨面上,此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)”?;こ史奂t色,光滑發(fā)亮、濕而潤滑,有時可見絨毛,內(nèi)含膠原性纖維。 滑膜細(xì)胞有A、B兩型。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞,表面有絲狀偽足、漿膜內(nèi)陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體,具有吞噬功能;B型成纖維 樣滑膜細(xì)胞(FLS) ,有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu),是介導(dǎo) RA 關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞。
細(xì)胞傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞凍存步驟
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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