1.這個好養(yǎng)嗎,有什么特別需要注意的地方嗎?
養(yǎng)活很容易,但是要保持其不成熟的狀態(tài)不容易。
2.它的表面標(biāo)記是什么?
CD86高表達,CD80CD83LPS刺激后高表達,MHCII低表達。
3.和人外周血或小鼠骨髓分離出來的單核細(xì)胞刺激生成的DC的主要區(qū)別有哪幾個方面?
優(yōu)點:方便
缺點:刺激T細(xì)胞增殖的能力很弱。
4.用于免疫方面的研究的話可以用DC2.4替代嗎?
分子免疫和細(xì)胞免疫,可以。
5.還有有人知道哪里可以買到嗎?
寧波明舟生物科技有限公司
6.實驗室培養(yǎng)經(jīng)驗
DC2.4對胰酶濃度 體積沒有要求,按自己正常消化步驟。消化一定要注意控制胰酶作用時間,胰酶消化是需要比較精細(xì)的操作,既要充分消化下細(xì)胞打散成單細(xì)胞懸液,均勻接種,又要避免消化過度造成細(xì)胞嚴(yán)重受損 。
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,不能完全規(guī)定消化時間,以客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。 對于消化這步,客戶如果對該細(xì)胞經(jīng)驗不多,無法準(zhǔn)確掌控胰酶作用時間
建議客戶按照下述操作:胰酶首先復(fù)溫到室溫后加入細(xì)胞,放入37度培養(yǎng)箱,然后每隔30秒,即吹打下細(xì)胞,如果能夠吹打散細(xì)胞,加入完全培養(yǎng)基終止消化,如果30秒吹打不下,再等30秒重復(fù)操作。
消化完成后加6-8ML完全培養(yǎng)基終止消化,混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。
第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。同時客戶要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)使用的血清質(zhì)量是否正常,完全培養(yǎng)基的PH值是否7.4左右 。
凍存液配方看說明書。
具體操作與大部分細(xì)胞一樣,沒有什么需要特殊注意的。